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细胞类代谢组学样本收集步调

2018年03月02日 10:42   泉源:上海希行科学仪器有限公司
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实用细胞范例:哺乳动物细胞(CHO、NS0、CD-hybridoma 细胞系)

样品量要求: 
1*10 7 cell/sample,供应 2 份样本。  

样本收集步调:

1) 运用细胞计数器测定细胞数目,计算出所需淬灭缓冲液的量。下图以细胞数目1*10 7 为例; 
NOTE:①运用50ml圆锥形管一次处置惩罚样本最大量为8ml,若是样本量>8ml,便离开做;②淬灭历程工夫敏感,最好两小我私家操纵。 

2) 将 5 倍样本体积的淬灭缓冲液到场 50ml 圆锥形管中;

3) 正在高温恒温器上预冷淬灭缓冲液至-40℃ (淬灭缓冲液:60%(v/v)甲醇+0.85%(wt/v)碳酸氢铵(pH7.4,运用 12M 的盐酸停止 pH 调治)。若是没有高温恒温器,能够运用干冰替代,并用高温温度计检测温度,包管每管皆处于-40℃,温度不克不及过低); 
NOTE: 因为单人操纵,最多 2 样本/次,双人操纵,4 样/次。包管淬灭处置惩罚敏捷。由于工夫要求“敏捷”。 

4) 吸收 1 体积的细胞样本(1*10 7 ),到场到盛有淬灭缓冲液的管中心。 NOTE: 温度必需保持正在-40℃阁下,低于 45℃时,会致使细胞破裂。

5) 迟缓摇摆管子,混匀。 
NOTE: 制止 Vortex 涡旋震动混匀!

6) 1000g 离心 1min; 

7) 去除上浑。NOTE:当上清被去除清洁后,继承揭壁吸收 5s 以包管上浑完整被去除,由于有些上清粘正在壁上,回落的话,会对后继操纵带来负面影响。

8) 运用 200μl -80℃的甲醇将细胞重悬,并转移到 1.5ml 的离心管中,然后用液氮冰冻;

9) -80 度冻存。充足干冰寄送。  

注意事项: 

1)淬灭缓冲液 pH 值要正在每次实用前从新测定调解。

2)温度要掌握好,强烈建议运用-40℃冰柜操纵。  

参考文献: 
Sellick C A, Hansen R, Stephens G M, et al. Metabolite extraction from suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling.[J]. Nature Protocol, 2011, 6(8):1241-9.


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